脂質體同時具有包埋脂溶性和水溶性活性物質的能力，極大提高了活性物質的傳遞效率，其在食品工業(yè)領域中的研究受到越來越多的關注。由于磷脂易發(fā)生不可逆的氧化降解和脂質體囊泡聚集沉降等現(xiàn)象，容易導致被包埋活性物質的滲漏，極大限制了脂質體在食品工業(yè)中的應用。

目前已有研究利用果膠、蛋白質、殼聚糖及其衍生物等食品生物大分子物質對脂質體膜表面進行修飾，從而提高其理化穩(wěn)定性。但新殼層材料的引入提高了食品脂質體的生產成本，使得制備工藝也更加復雜，規(guī)模化的工業(yè)生產容易因設備的限制導致產品質量不理想。同時考慮到膳食膽固醇長期過量攝入對人體的影響，如何控制脂質體中膽固醇的用量，以期得到穩(wěn)定性良好且膽固醇相對含量偏低的脂質體是本研究的主要目的。高壓均質法作為乳劑傳遞體系常用的破碎乳化制備方法，對提高乳劑的物理穩(wěn)定性有重要作用，目前已在工業(yè)化生產中大規(guī)模應用；因此在工業(yè)化生產中利用高壓均質法制備食品脂質體具備實際應用的可能。

本實驗采用傳統(tǒng)薄膜水化法輔助高壓均質制備脂質體，考察均質壓力、均質次數(shù)和膽固醇含量對脂質體囊泡物理穩(wěn)定性的影響。

1. 材料和方法

1.1 高壓均質法制備脂質體

采用薄膜水化結合高壓均質法制備脂質體。準確稱取1g大豆卵磷脂和適量的膽固醇，用25 mL的san氯甲烷將其溶解，40 ℃條件下利用真空旋轉蒸發(fā)儀減壓蒸發(fā)除去san氯甲烷，待有機相在圓底燒瓶底部形成薄膜后加入100 mL PBS（0.05 mol/L、pH 7.0），利用超聲水浴將磷脂膜洗脫，制成粗脂質體混懸液。利用高速剪切儀將粗脂質體混懸液高速剪切分散1 min（10 000 r/min），最后經(jīng)由高壓均質機分別在20～80 MPa條件下循環(huán)均質1～6 次得到脂質體制劑。

1.2 SLN物理穩(wěn)定性分析

使用 LUMiSizer®進行測試，轉速：4000 rpm、測試時長：2h，時間間隔：20 s、溫度：25 ℃。以不穩(wěn)定性指數(shù)隨時間變化曲線以表示樣品在測試過程中的失穩(wěn)狀態(tài)，不穩(wěn)定性指數(shù)越高代表體系越不穩(wěn)定，反之乳狀液穩(wěn)定。

2. 結果與分析

2.1 均質壓力對脂質體穩(wěn)定性的影響

   圖1 不同均質壓力制備的脂質體透光率圖譜（A）及不穩(wěn)定性指數(shù)隨時間的變化曲線（B）

從圖1A透光率圖譜中可以看出，20 MPa和30 MPa處理后的脂質體經(jīng)2 h測試后，樣品整體的透光率均有所增大，且不穩(wěn)定系數(shù)隨時間的延長而顯著增大，說明脂質體的物理穩(wěn)定性相對較差。其中30 MPa處理樣品離心前后的透光率變化最大，與其粒徑和PDI增大的結果一致，脂質體因更容易發(fā)生聚集沉淀而導致物理穩(wěn)定性降低。均質壓力高于40 MPa時，脂質體樣品在測試過程中的透光率幾乎無明顯變化，且不穩(wěn)定系數(shù)的變化幅度也降低，說明脂質體粒徑的降低對樣品物理穩(wěn)定性的提高有促進作用。結合粒徑和PDI的數(shù)據(jù)，發(fā)現(xiàn)脂質體整體粒徑與樣品物理穩(wěn)定性有直接關系，降低脂質體的粒徑可提高其在室溫條件下的貯藏穩(wěn)定性。

2.2 均質次數(shù)對脂質體穩(wěn)定性的影響

圖2 不同均質次數(shù)制備的脂質體透光率圖譜（A）及不穩(wěn)定性指數(shù)隨時間的變化曲線（B）

由圖2可知，在考察不同均質次數(shù)處理后脂質體的物理穩(wěn)定性時發(fā)現(xiàn)，無高壓均質處理的脂質體，其物理穩(wěn)定性極差。經(jīng)過高壓均質處理后，脂質體的物理穩(wěn)定性顯著提高。但在50 MPa均質壓力下，經(jīng)不同均質次數(shù)形成的脂質體樣品的透光率無顯著變化，說明提高均質次數(shù)對脂質體的物理穩(wěn)定性無顯著影響。綜合不同均質壓力的實驗結果，當高壓均質形成脂質體的粒徑低于150 nm時，脂質體樣品在測試過程中的物理穩(wěn)定性無明顯差異。

2.3 m（大豆卵磷脂）：m（膽固醇）對脂質體穩(wěn)定性的影響

圖3 不同大豆卵磷脂于膽固醇質量比制備的脂質體透光率圖譜（A）

及不穩(wěn)定性指數(shù)隨時間的變化曲線（B）

由圖3可知，m（大豆卵磷脂）∶m（膽固醇）＝2∶1脂質體的物理穩(wěn)定性最差，說明過多膽固醇的載入不利于高壓均質后脂質體物理穩(wěn)定性的提高，而適量膽固醇的載入對其物理穩(wěn)定性無顯著影響。從不穩(wěn)定系數(shù)曲線的局部放大圖中可以發(fā)現(xiàn)，當m（大豆卵磷脂）∶m（膽固醇）從10∶1降低至3∶1時，曲線變化的斜率逐漸降低，說明適當提高磷脂膜中膽固醇的相對含量對高壓均質脂質體物理穩(wěn)定性的提高有促進作用。

3. 結論

（1）增加均質壓力和均質次數(shù)可顯著提高脂質體囊泡的物理穩(wěn)定性，但均質壓力和均質次數(shù)分別高于50 MPa和3 次后，脂質體囊泡物理穩(wěn)定性的提高效果不再顯著。

（2）m（大豆卵磷脂）∶m（膽固醇）＝3∶1對未來利用高壓均質法制備包埋有活性物質的脂質體在提高樣品穩(wěn)定性上有一定的參考價值。

（3）LUMiSizer分散體系分析儀，應用STEP技術，對配方穩(wěn)定性分析提供了快捷有效的工具。不僅可以同時檢測12個樣品，而且多波長（近紅外865nm、藍光410nm）覆蓋多品類樣品的測試，為用戶可提供更多更深入的分析信息，極大提高了工作效率。